馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Pda)培養(yǎng)基配方制備方法操作步驟與注意事項
日期:2021-12-03 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:4061 次
中海生物PDA培養(yǎng)基全稱為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,其主要供霉菌和酵母菌計數(shù)及分離培育(GB4789.15-2010和ISO標準)。它用來各類大大小小的微生物檢測實驗操作。
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)配方 | ||
馬鈴薯 | 200g | 提煉浸出粉,有利于各種霉菌的生長發(fā)育 |
葡萄糖 | 20g | 葡萄糖可以提供能量 |
瓊脂 | 14-20g | 培養(yǎng)基的凝固劑 |
水 | 1000ml | |
氯霉素 | 0.1g | 能抑制細菌病毒的生長發(fā)育 |
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Pda)培養(yǎng)基制備方法操作流程步驟
步驟⑴洗凈去皮
洗凈去皮馬鈴薯二百克,葡萄糖二十克,瓊脂十四至二十克。
步驟⑵加水煮爛
將馬鈴薯用刀切割成小塊,放進鍋中,增添1000毫升水,燒開二十至三十分鐘左右,能被玻璃棒捅破就可以了。
步驟⑶過濾殘渣
用八層紗布過濾馬鈴薯渣。
步驟⑷增添瓊脂
加熱后依據(jù)據(jù)具體實驗操作復需要加十四至二十克瓊脂,繼續(xù)加熱攪拌混勻,待瓊脂充分均勻溶解完。
步驟⑸定容一千毫升
增添葡萄糖二十克,攪拌均勻,待所有葡萄糖充分均勻溶解后,稍冷卻后添加適量的水,填補加熱操作過程中流失的水分,并將體積設定為一千毫升。
步驟⑹分開包裝細節(jié)
按照各種不同的實驗操作目的,中海制備PDA培養(yǎng)基可以分開包裝在試管或三角瓶中。在分開包裝操作過程中,需要留意不能污染PDA培養(yǎng)基瓶口,以防打濕棉條導致污染。假如不使用棉塞,還可以用橡膠塞或專用的金屬塑料試管帽。為了更好地讓空氣隨意出入,膠塞不可過緊,消毒滅菌前要在噴嘴處夾住一條棉紗線。分開包裝后,在管口或瓶口處放一個棉塞。棉塞應由未脫脂的彈性棉制成。棉塞可以過濾空氣,預防細菌病毒侵入,緩減馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(pda)中水的揮發(fā),從而被普遍使用于植物病理學研究。
步驟⑺試管標注
封堵后,用細繩將試管扎好,然后在棉塞上包裹一層牛皮紙,預防消毒滅菌時冷凝水打濕棉塞,再用細繩扎好。用標記筆標注馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的名稱/制備日期/組和生產(chǎn)商。
步驟⑻消毒滅菌
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基在0.103兆帕、121度的高壓蒸汽下消毒滅菌二十分鐘左右,冷卻后貯藏備用。
常見馬鈴薯葡萄糖瓊脂(pda)培養(yǎng)基注意事項:
①消毒滅菌后,中海PDA培養(yǎng)基務必在三十七度恒溫培養(yǎng)箱中培育一天,無菌生長者方可使用。
②PDA培養(yǎng)基通常不用調控ph酸堿度,但對于需要調控ph酸堿度的中.海培養(yǎng)基,通常用ph試紙來測量其酸堿度,如果馬鈴薯培養(yǎng)基是偏酸性或堿性的,可以用氫氧化鈉或鹽酸溶液調控。調控時應逐滴添加氫氧化鈉或鹽酸溶液,以避免局部過酸或過堿毀壞培養(yǎng)基成份。
③大家在使用時也可制成沒有瓊脂的液體培養(yǎng)基,用來做真菌的搖瓶培養(yǎng)。
④馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中'海還能夠添加氯霉素或土霉素,添加量為0.2克/升培養(yǎng)基,主要是抑制細菌病毒的生長發(fā)育降低影響。
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