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    配制培養(yǎng)基時的注意事項以及常見問題分析

    日期:2023-10-25 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:820 次

    一、配制培養(yǎng)基時的注意事項

     

    01

    培養(yǎng)基在滅菌前,需進行加熱溶解(含瓊脂的培養(yǎng)基需煮沸4-6次至瓊脂完全溶解),再進行分裝滅菌(應不超過1000mL);

    02

    含瓊脂培養(yǎng)基,若滅菌前未進行加熱溶解,滅菌后需充分搖勻使用;

    03

    所有培養(yǎng)基不宜滅菌過度和長時間保溫,特別是含糖量高的培養(yǎng)基,如沙氏葡萄糖瓊脂,滅菌過度或保溫時間過長易使葡萄糖發(fā)生焦化,滅菌后的培養(yǎng)基顏色會變深,pH會下降,此外還會使蛋白胨中的維生素分解,降低培養(yǎng)基的營養(yǎng);

    04

    需另加添加劑的培養(yǎng)基通常在培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時加入,已加入添加劑的瓊脂類培養(yǎng)基不可熔化再次使用;

    05

    配制好的培養(yǎng)基需及時滅菌,不可久置;

    06

    培養(yǎng)基不可重復滅菌;

    07

    瓊脂培養(yǎng)基不可反復熔化使用;待用的瓊脂培養(yǎng)基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫,一般不可超過4小時;

    08

    使用蒸餾水或純化水配制。飲用水或自來水中由于含礦物鹽離子,配制培養(yǎng)基會產(chǎn)生渾濁現(xiàn)象;

    09

    容器不易過滿,容量至少應比培養(yǎng)基體積大20%。

     

    二、配制過程中的常見問題分析

     

    01
    培養(yǎng)基顏色不正確

    (1)含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基,若顏色不正確,通常是由于pH不正確導致的,加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導致此項問題。

    (2)加熱過度導致某些成分分解或糖焦化,如SC培養(yǎng)基加熱過度會變紅,含糖量高的培養(yǎng)基,加熱過度通常會出現(xiàn)顏色加深,呈焦糖色或棕褐色。

    (3)某些成分變質,如血液久置易變黑,制成的平板顏色偏棕黑色。

     

    02
    培養(yǎng)基不凝固或凝固性差

    (1)稱量錯誤

    (2)瓊脂分布不均勻

    (3)培養(yǎng)基pH不正確

    (4)加熱過度

    (5)瓊脂量不足

    滅菌前未加熱溶解,滅菌后未充分搖勻,

    會出現(xiàn)分層現(xiàn)象,瓊脂凝固在底層,上層不凝固

    03
    培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀

    (1)某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培養(yǎng)基等,配方中含有大量不溶性碳酸鈣。

    (2)滅菌前未充分溶解,如Fraser培養(yǎng)基中含有大量磷酸鹽,若滅菌前溶解不充足,滅菌后就會出現(xiàn)大量沉淀。

    (3)pH不正確,偏酸或偏堿都有可能使培養(yǎng)基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。

    (4)水的純度不夠,天然水中含有較多的礦物鹽離子,若未除凈,則易與培養(yǎng)基中的磷酸鹽反應生成沉淀。

    (5)添加劑加入溫度不正確,卵黃、血液等對溫度敏感的添加成分,若加入時溫度過高或溫差過大,易出現(xiàn)凝塊。

    (6)稱量錯誤。

    (7)試劑加入順序不正確

    04
    培養(yǎng)基污染

    (1)滅菌方式不正確,導致滅菌不徹底

    (2)滅菌鍋的滅菌效力不達標

    (3)滅菌量過多,滅菌前未加熱溶解

    (4)培養(yǎng)基本身含耐熱菌較多

    (5)滅菌過程中,滅菌鍋內冷空氣未排干凈

    (6)滅菌鍋放置過滿

    (7)操作過程發(fā)生污染

    (8)分裝培養(yǎng)基器皿滅菌不充分

    (9)濾膜破損


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