中海生物技術關于質(zhì)控菌種復蘇和存放常見的十五個問題，簡單做以下解答，希望對大家有所幫助：

問題①該菌種為第三代，假如在零下八十℃存放后取出活化，應屬哪一代？

解答：存放下來的是，第三代復活后，假如用盤子或者肉湯激活，相當于遷移了最初代，也就是第四代，假如還在瓷珠里，依然是原本的代數(shù)。假如保持在一個斜面上，這種斜面永遠是第三代，假如遷移到另一個斜面上，便是第四代。傳代培養(yǎng)/菌種活化/復蘇的原理，無論以全部形式繁殖一次，都是一代代傳下來的。然而，假如只有物理位置遷移而沒有復制，那就不是通過。

問題②當菌種傳代培養(yǎng)并存儲在瓷珠中時，我們必須選取一個菌體嗎？

解答：并不一定要挑單獨一個菌體，但一定要挑基本特征一致的菌體，也就是從同一個菌體中提純出來，保證它們的基本特征完全相同。原則是選取盡可能多，而不是少。

問題③菌種在零下七十度或是零下八十度低溫存放有具體實施標準規(guī)范嗎？

解答：有標準規(guī)范?！段⑸锞N常規(guī)存放技術規(guī)范》是菌種保存的標準規(guī)范。你可以認真了解一下。全部的存放措施都有介紹，但瓷珠是一類相對比較新的存放措施，現(xiàn)階段都還沒收錄。GB4789.28至2013推薦長期性凍藏環(huán)境溫度不超過零下七十度。

問題④如何增加菌種的存放時長？

解答：很多科學試驗證實，該菌種在低溫/干燥/缺氧和缺乏營養(yǎng)的條件下存放效果最合適，越接近這一存放條件，該菌種的存放時長越長。比如甘油冷凍管，在零下八十攝氏度的存放時長比在零下二十攝氏度的存放時長要長。凍干菌粉可在零下二十攝氏度存放比二至八度環(huán)境時間長。

問題⑤怎樣純化菌種？

解答：純化是從可疑菌體平板中挑選單獨一個菌體，并在合適的非選擇性平板(TSA、NA)上劃線的操作過程。分離出來單獨一個菌體。

問題⑥我們是不是需要重新傳代培養(yǎng)，只存放最初代菌種？你覺得這是一個錯誤嗎？

解答：通常狀況下，是并不會問如此的問題的。最合適的存放措施應該是制備最初代菌種的甘油凍存管，放進超低溫冰箱中長期存放。第二代應變做為工作儲備應變，存放在斜面上。遷移后的第三代工作應變選用第二代工作儲備應變。

問題⑦為什么要用第三代做為工作菌種？

解答：歷經(jīng)幾次傳代培養(yǎng)后，毒株的突變概率會大大增加，所以毒株的傳代培養(yǎng)需要控制在五代以內(nèi)，而最初代毒株通常相對來說不穩(wěn)定，需要傳到第三代才可以穩(wěn)定毒株。所以在實際的工作中，中海生物通常選取第三代菌種做為工作菌種。

問題⑧質(zhì)控品菌種傳五代以上是不是要銷毀？

解答：并不一定。歷經(jīng)五代以上的傳代培養(yǎng)，只有品系變異的可能。然而，假如為第六代和第七代通行...是通過形態(tài)學/生化基本特征/DNA基本特征等來驗證的，并且性狀保持穩(wěn)定，那么這些細菌在第五代之后仍然可以正常采用。

問題⑨菌種編碼目的？

解答：以金黃色葡萄球菌CMCCB26003為例。CMCC是中國醫(yī)學文化收藏中心的簡稱。其他常見的文化收藏包括ATCC美國標準文化收藏、CICC工業(yè)微生物文化收藏中心和FSCC食品安全文化收藏中心。B指細菌，F(xiàn)指真菌；2003年是CMCC的存放編碼。

問題⑩金黃色葡萄球菌ATCC6538和ATCC25923都有啥區(qū)別？

解答：這兩種皆來自（ATCC）美國標準培養(yǎng)物保藏中心的ATCC6538和ATCC25923菌種。不同的數(shù)字表明這兩個菌種的初始分離出來源不同。然而不同的編號的生化基本特性是不是一致，需要深入分析研究。在常常的生物學檢驗試驗中，發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌ATCC6538的溶血能力強于ATCC25923。

問題?用瓷珠存放管存放菌種。為什么要在加入菌液并搖勻后吸干菌液？

解答：瓷珠存放的原理是瓷珠是多孔的，細菌吸附在瓷珠上。假如去除液體，可以避免液體冷凍操作過程中產(chǎn)生的冰晶在反復凍融操作過程中破壞細菌，最終得以保護細菌。假如菌液不吸干，瓷珠的存放就達到不了反復凍融的效果。

問題?你們TSA斜面儲藏于多少度？你能把它放在冷庫里嗎？

解答：細菌的TSA斜面通常存放在二至八攝氏度，即冷凍冷藏。而弧菌/銅綠假單胞菌/嗜水氣單胞菌等對低溫敏感的菌種，在二十至二十五攝氏度的室內(nèi)溫度下短時間存放，用甘油管或瓷珠長期性冷凍。

問題?液體培養(yǎng)基可以用以回收凍干菌種嗎？

解答：可以，但假如選用液體復蘇，只能夠觀察到混濁的中海培養(yǎng)基，不可以確定是不是有污染。推薦選用平板培養(yǎng)基復蘇凍干菌種，有利于促進簡單通過肉眼觀察菌體形態(tài)來鑒別回收菌種是不是被污染，初步鑒定菌種的純度。

問題?顯色培養(yǎng)基可以用于凍干菌種的回收嗎？

解答：不建議使用顯色培養(yǎng)基復活凍干菌種。凍干菌種是凍干的。在這個操作過程中會受到一定程度的破壞，復蘇需要一個最合適的生長環(huán)境，所以不可以選取復蘇培養(yǎng)基做為帶有抑菌成份且不利于菌種復蘇的選擇性培養(yǎng)基。顯色培養(yǎng)基應屬選擇性培養(yǎng)基。

問題?產(chǎn)氣莢膜梭菌冷凍時需要保持厭氧狀態(tài)嗎？

解答：并不需要。產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌應屬厭氧菌，但對厭氧程度要求不太嚴格要求，可以根據(jù)通常菌種冷凍法做好冷凍。如果是嚴格要求目的上的厭氧菌，需要特殊的冷凍措施。

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