中海生物技術公司（zhzbio.com）為您介紹微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制中的養(yǎng)分濃度和配比合適、培養(yǎng)基pH條件控制、培養(yǎng)基原料來源選擇、成品培養(yǎng)基滅菌處理等四個關鍵方面。

　　①養(yǎng)分濃度和配比合適

    微生物只有在培養(yǎng)基中養(yǎng)分濃度合適的情況下才能生長良好是合適的。當養(yǎng)分濃度過低時，不能滿足微生物正常生長的需要。當濃度過高時，可能會抑制微生物的生長，注意養(yǎng)分濃度比和C/N比，糖含量必須適合微生物的生長。如高濃度糖類、無機鹽、重金屬離子等過多，不能維持和促進微生物的生長增強，反而抑制微生物的生長同時起到抗菌或殺菌作用。

    此外發(fā)酵培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度比也直接影響微生物的生長繁殖或代謝物的形成和積累。通常微生物適宜的碳氮比[C/N]為25:1影響較大。嚴格來說，碳氮比是指培養(yǎng)基中碳氮量的比值和培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白的比例。例如在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中，發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮比為4 / l時，細菌繁殖多谷氨酸積累少，13001930979當發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮比為3 / l時，細菌繁殖受到抑制則谷氨酸產(chǎn)量大大增加。在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)過程中，可以控制培養(yǎng)基中速效氮碳源與遲效氮碳源的比例，以控制細菌生長和抗生素協(xié)調(diào)。

　?、谖⑸锱囵B(yǎng)基pH條件控制

    培養(yǎng)基的pH必須控制在一定范圍內(nèi)，以滿足不同種類微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝物。各種微生物生長繁殖或代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的最佳pH條件不同。通常細菌和放線菌適合在7~7.5pH范圍內(nèi)生長，酵母菌和霉菌一般在4.5~6pH范圍內(nèi)生長。值得注意的是，在微生物的生長繁殖和代謝過程中，鑒于營養(yǎng)物質(zhì)的分解利用和代謝產(chǎn)物的形成和積累，培養(yǎng)基的pH值會發(fā)生變化。如果中.海培養(yǎng)基的pH條件得不到控制，往往會導致微生物的生長速度及減少代謝物的產(chǎn)量下降。所以為了保持中海培養(yǎng)基的比較恒定的pH值，通常會在培養(yǎng)基中加入pH緩沖液。常用的緩沖液是磷酸一氫和磷酸二氫的混合物。磷酸一氫溶液呈堿性，磷酸二氫溶液呈酸性，兩種物質(zhì)等量混合溶液的pH值為6.8。當介質(zhì)中酸性物質(zhì)積累導致氫離子濃度升高時，氫離子與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物，介質(zhì)pH不會過度降低；如果介質(zhì)中氫氧根離子濃度增加，氫氧根離子會與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物，介質(zhì)的pH值不會過度升高。但磷酸一氫和磷酸二氫緩沖體系只能在6.4～7.2pH值內(nèi)起調(diào)節(jié)作用。一些微生物，比如乳酸菌，可以大量產(chǎn)酸，上面提到的緩沖系統(tǒng)很難緩沖。這時可在微生物培養(yǎng)基中加入不溶性碳酸鹽、碳酸鈣進行調(diào)節(jié)。碳酸鈣難溶于水，不會過度提高介質(zhì)的pH值，但可以不斷中和微生物產(chǎn)生的酸，同時釋放二氧化碳，控制介質(zhì)的pH值在一定范圍內(nèi)。中'海培養(yǎng)基中有一些天然的緩沖系統(tǒng)，如氨基酸、肽、蛋白質(zhì)等，都屬于兩性電解質(zhì)，也可以作為緩沖液作用。

　?、畚⑸锱囵B(yǎng)基原料來源選擇

    中海培養(yǎng)基配制時，應盡可能使用低廉易得的原料作為培養(yǎng)基成分。尤其在發(fā)酵行業(yè)，培養(yǎng)基用量大，使用成本較低原料實現(xiàn)產(chǎn)品附加價值。例如在微生物單細胞蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，制糖業(yè)含蔗糖廢液、乳業(yè)含乳糖廢液、大豆廢液工業(yè)和黑色廢物、造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸鹽紙漿等經(jīng)常被作為培養(yǎng)基原料使用。加工業(yè)甲烷發(fā)酵主要以廢水和廢渣為原料，而在鄉(xiāng)村，則推廣使用人畜糞便和草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷為燃料。以及大量的農(nóng)副產(chǎn)品或產(chǎn)品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是工業(yè)常用發(fā)酵原料。

　　④成品培養(yǎng)基滅菌處理

    為了獲得微生物的純培養(yǎng)物，必須避免被細菌污染，所以對使用的設備和工作場所進行消毒和消毒。對于微生物培養(yǎng)基要進行嚴格的滅菌處理。通常中海培養(yǎng)基使用高壓蒸汽滅菌，常用培養(yǎng)基為1.05kg/cm2，在121.3攝氏度下保持十五至三十分鐘即可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長期高溫會破壞某些不耐熱的物質(zhì)，如碳水化合物，形成氨基糖和焦糖。因此，含糖培養(yǎng)基通常為0.56kg/cm2，112.6攝氏度滅菌十五至三十分鐘。對于一些對糖分要求較高的介質(zhì)，可以將糖分過濾除菌或間歇除菌，再與其他除菌成分混合，長期高溫還會導致磷酸鹽與某些陽離子（鈣、鎂、鐵離子）結合形成難溶性絡合物產(chǎn)生沉淀。因此在配制用于微生物生長觀察和定量測定的合成培養(yǎng)基時，往往需要在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免在培養(yǎng)基中沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸。乙二胺四乙酸也可以將含有鈣、鎂、鐵離子的成分分別用磷酸鹽和碳酸鹽殺菌，然后混合，避免形成沉淀；高壓滅菌后，中 海培養(yǎng)基的pH值會發(fā)生變化（使pH減少0.2），可根據(jù)培養(yǎng)微生物的要求在培養(yǎng)基滅菌前后進行調(diào)整。

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