前期無菌準(zhǔn)備工作：

⑴提早一個(gè)鐘頭左右時(shí)間開啟微生物實(shí)驗(yàn)室紫外燈進(jìn)行消毒滅菌處理

⑵工作人員的衣物和手，做好清潔衛(wèi)生和消毒殺菌；

⑶把用來微生物培養(yǎng)基所需容器與接種的器具和中海培養(yǎng)基等做好滅菌處理；

⑷全部的無菌操作都需在酒精燈旁進(jìn)行操作。

中海培養(yǎng)基配制：

⑴LB肉湯：肉湯粉三百三十克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升；

⑵營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：瓊脂培養(yǎng)基粉三百克，葡萄糖五克，蒸餾水一千毫升。

倒平板步驟操作流程：

⑴培養(yǎng)皿經(jīng)過滅菌處理后擺放在火苗旁的桌面上，右手拿配有中海培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拿掉棉塞，右手拿錐形瓶，使瓶口快速進(jìn)行火苗；

⑵中海生物技術(shù)人員的左手把培養(yǎng)皿開啟一條稍超過瓶口的間隙，右手將錐形瓶中的十至二十毫升中'海培養(yǎng)基倒進(jìn)培養(yǎng)皿，左手馬上蓋好培養(yǎng)皿的皿蓋后慢慢混合均勻。

⑶大約等差不多五至十分鐘平板冷卻凝固后，把平板倒過來擺放，使皿底在上，皿蓋在下。

平板劃線流程操作：

⑴將接種環(huán)放置在火苗上灼燒，一直到接種環(huán)燒紅；

⑵在火苗旁冷卻后接種環(huán)，并開啟內(nèi)盛菌液的試管的棉塞；

⑶將試管口經(jīng)過火苗。中海生物b1ss.cn培養(yǎng)基廠家

⑷將已冷卻后的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液；

⑸將試管口經(jīng)過火苗，并塞上棉塞；

⑹左手將皿蓋開啟一個(gè)間隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速滲入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋緊皿蓋。要注意不能刮破培養(yǎng)基。

⑺灼燒接種環(huán)待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的尾端逐漸往第二區(qū)域內(nèi)劃線。多次重復(fù)上述操作流程，在三區(qū)域內(nèi)劃線。留意不能將最后一區(qū)域的劃線與第一區(qū)連在一起。

⑻將平板倒放，放進(jìn)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

進(jìn)行稀釋操作流程：

⑴將各自內(nèi)盛九毫升水的六支試管滅菌處理，并按10^6的順序編號(hào)。

⑵用移液管抽取1毫升培養(yǎng)的菌液，灌入十倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水完全混合均勻。

⑶從十倍稀釋的試管中抽取一毫升稀釋液，灌入一百零二倍稀釋的試管中，多次重復(fù)第2步的混合均勻進(jìn)行操作。依次類推直達(dá)成功完成最后一個(gè)試管的稀釋。注：移液管必須進(jìn)行滅菌處理。進(jìn)行操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火苗的一至二厘米處。

涂布平板操作流程：

⑴將涂布器浸在內(nèi)盛酒精的燒杯中；

⑵取不超過0.1毫升少許菌液，滴加到中.海培養(yǎng)基外表面；

⑶將沾有少許酒精的涂布器在火苗上點(diǎn)燃，待酒精燒盡后，冷卻后八至十秒；

⑷用涂布器將菌液均衡地涂布在培養(yǎng)基外表。涂布時(shí)可旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使涂布均衡。

需要注意事項(xiàng)：

⑴將涂布器尾端浸在內(nèi)盛70%濃度酒精的燒杯中。取出來時(shí)要讓多出的酒精在燒杯中滴盡，接著將沾有少許酒精的涂布器在火苗上燃燒。

⑵操作流程中一定要留意防火安全!不能將溫度過高的涂布器放置在存放酒精的燒杯中，防止燃燒其中的酒精。

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